灰树花起什么作用？
灰树花（Grifola frondosa），又名贝叶多孔菌、栗子蘑、灰包、灰菇、灰树花菌等。是一种寄生在栗子上面的真菌。属于非药用类真菌。其子实体主要含有多糖类、核苷酸类及核酸类等物质成分，具有免疫调节、抗突变、抗肿瘤、降血糖、降血脂和抗氧化等作用。目前对灰树花的药理研究较多，而对其毒理学方面的研究较少。本实验通过小鼠骨髓细胞微核试验和小鼠精子畸形试验初步探讨了不同浓度灰树花多糖的体外毒性，以及体内给药后对雄性小鼠生育能力的影响 材料和方法 1.1 药品与试剂 灰树花多糖（polygalacturonan）为白色至灰褐色粉末；β-琉球霉素（β-mangostin），阳性对照药；以上2种药物均由浙江温州医科大学提供。硫代硫酸钠、醋酸铋、甲酰胺、对苯二胺氢碘酸盐、醋酸铅、冰醋酸均为国产分析纯化学试剂。
1.2 仪器 倒置显微镜（XSP-40，上海精密仪器有限公司）；超净工作台（SW－CJ－2F，苏州净化设备厂）；电热恒温培养箱（DHP－9082，上海跃进医疗器械厂）；电子天平（FA160N，上海越平精密仪器有限公司）；离心机（TDL－50K，北京四环科学仪器厂）；酶标仪（Model 630，美国Bio-Rad公司生产）。
1.3 动物 ICR小鼠，清洁级，雄性，体重（20±2）g，由本校实验动物中心提供[合格证号SCXK（沪）2007－0005]。
1.4 方法 1.4.1 多糖的提取 取适量灰树花，按1：50加水浸泡3h，然后沸水浴加热40min，离心取上清液，加入95%乙醇沉淀多糖，真空干燥后得粗多糖，用蒸馏水溶解后置入冰箱中备用。
1.4.2 多糖含量的测定 采用苯酚-硫酸法[7]。
1.4.3 精子形态学检查 取附睾尾精液的涂片，经吉姆萨染色后，在光学显微镜下记录并计算精子畸形率。每一标本计数100个精子。
1.4.4 骨髓细胞微核检测 取SD大鼠双侧股骨，以2ml生理盐水冲洗骨髓腔，制成单细胞悬液，以200目不锈钢网的网眼过滤，除去纤维蛋白原，调整细胞浓度为5×106/ml。将细胞悬液滴于载玻片上，晾干后置于37℃、5%CO2饱和湿度环境中孵育48h。取出后吹打细胞，制成细胞混悬液，滴加于另一载玻片上，晾干后立即进行吉姆萨染液染色，镜检10个视野，每视野含500个细胞，计 算骨髓细胞微核率。
1.4.5 体内给药试验 将灰树花多糖配成浓度为10、25、50mg/kg的水溶液，分别给雄性小鼠连续腹腔注射7d。对照组给予等容积的蒸馏水。末次给药后1h，各组小鼠均断头处死，迅速取出睾丸，剥离精囊，精密称量。同时取血清20μl，用于测定性激素水平。
1.4.6 血清性激素水平的测定 采用放射免疫分析法[8]测定血清中睾酮（T）、雌二醇（E2）含量。
结果 2.1 多糖的含量 2.1.1 标准曲线 以多糖量（μg）为横坐标，以吸光度值A为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=0.0117X+0.0053，r=0.9975。表明多糖量与吸光度值具有良好的线性关系。
2.1.2 样品测定 从0.13～0.42μg/ml范围内，多糖浓度与吸收度值呈良好直线关系，其回归方程为Y=0.0165X+0.0096，r=0.9975，见图1。 根据标准曲线计算出各样品中的多糖含量分别为：1.074、1.049、1.132和1.068μg/mg。
2.2 精子形态 在所观察的400个精子中，有225个精子形态正常，形态异常率为56%，其中头部畸形190个，中段畸形22个，尾部畸形29个，见图2。
2.3 骨髓细胞 微核试验在小鼠体内给予不同剂量的灰树花多糖后，与模型组比较，各剂量组小鼠骨髓嗜多核白细胞微核率均无显著性差异（P＞0.05），提示灰树花多糖对小鼠染色体可能无明显损伤作用，见表1。
2.4 体内给药试验 小鼠连续7d腹腔注射灰树花多糖后，与对照组比较，各剂量组小鼠睾丸重量无显著性差异（P＞0.01），血清性激素水平亦无明显变化（P＞0.01），说明灰树花多糖对小鼠的生育功能无明显抑制作用，见表2。
讨论 目前，从微生物、动植物中提取的有效成份或天然药物制剂已成为新药研发的热点之一。随着现代生物技术的发展和应用，对复杂天然产物结构的研究和分离手段不断提高，使其结构和功效之间的关系得以阐明，为研制新型药物提供了重要基础。 本次实验中所用的灰树花多糖含量较高，达1.068％，但提取过程较复杂，需用水提醇沉、透析、冷冻干燥等方法才能最终得到。
近年来，对多糖类的研究较为广泛，而关于其致癌性和免疫毒性尚有争论，有的学者认为多糖类物质能刺激免疫细胞发生免疫功能，从而起到抑制肿瘤的发生和发展，但另一部分学者却得出相反的结论，即多糖类物质可以诱发癌症。其原因可能是多糖的剂量、性质和机体状况的差异所致。 本实验结果显示，给小鼠腹腔注射不同剂量的灰